Toutes les versions de la coloration EM Uranyless

UranylessUranyless Cryo AFS Uranyless Alcohol
SolventH2O water DistiledAcetoneEthanol 30%
Use Contrast agent for ultrathin sections or negative stainingBlock staining for AFSStaining of dense and lipid-rich tissues
Cryofixation 
Technique Manual StainingAutomatic staining for EM stain Leica or RMC grids stainerManual StainingManual StainingAutomatic staining for EM stain Leica or RMC grids stainer
Volume 30ml 200ml 100ml 30ml 200ml 
Reference 11000 11000-200 11000C-100 11000E-30 11000E-200 

Uranyless

La solution de contraste aqueuse EM Stain Uranyless est une alternative au d’acétate d’uranyle. Comme recommandé par Reynolds (1963), il est fortement conseillé de renforcer le contraste initial (Uranyless) avec du citrate de plomb dans une atmosphère saturée de NaOH afin d’éviter toute contamination par le CO₂ atmosphérique.

Pour faciliter l’utilisation du citrate de plomb lors du contraste, il est conditionné dans des flacons AirLess (sans air et donc sans CO₂). Ce flacon de 30 ml peut être conservé longtemps sans risque de contamination au CO₂, un problème fréquent pour les microscopistes.

Le conditionnement en flacon AirLess de 30 ml permet de réaliser le contraste de plus de 1500 grilles.

Ce conditionnement est doublement efficace : il offre une longue durée de conservation et génère un minimum de déchets.

Pour l’utilisation de UranyLess aqueux dans les appareils de contraste automatisés, tels que le Leica EM Stain, UranyLess est disponible en flacon de 200 ml. Il est important de noter que UranyLess aqueux est conditionné dans un flacon AirLess uniquement pour faciliter le dosage en gouttes, car il n’est pas affecté par l’air ni par la lumière.

Protocoles d'utilisation pour le contraste classique

Protocole Classique : Protocole de Double Contraste sur Coupes Ultrafines avec UranyLess / Citrate de Plomb
Ce protocole est adapté aux échantillons biologiques préalablement fixés selon des méthodes conventionnelles, telles que l’utilisation de glutaraldéhyde, osmium, ruthénium, et inclus dans des résines époxy (Epon, Araldite, Spurr) ou acryliques (LRWhite, HM20, etc.).

Protocole de Contraste :

  1. Déposez une goutte de UranyLess sur du parafilm ou toute autre surface hydrophobe.
  2. Placez la grille sur la goutte de UranyLess pendant 1 à 2 minutes.
  3. Tamponnez la grille sur du papier filtre, puis rincez-la délicatement avec de l’eau distillée.
  4. Laissez sécher.
  5. Après séchage, renforcez le contraste avec du citrate de plomb, selon la méthode de Reynolds (1963) :
  6. Placez la grille sur une goutte de citrate de plomb, en suivant la méthode de Reynolds, dans une atmosphère saturée en sodium pendant 1 minute.
  7. Tamponnez la grille sur du papier filtre, puis rincez-la délicatement avec de l’eau distillée.
  8. Laissez sécher.

Coloration EM Uranyless : protocole de contraste classique

Coloration Négative

La coloration négative est une technique très utile en microscopie électronique, permettant de caractériser la morphologie de particules isolées telles que des bactéries, virus, protéines, nanoparticules, liposomes, exosomes, etc.

Protocole de Coloration :

  1. Sur un morceau de parafilm ou toute autre surface hydrophobe, déposez une goutte d’environ 10 µl de votre solution ainsi qu’une goutte de UranyLess.
  2. À l’aide de pinces fines, placez une grille recouverte d’un film formvar-carbone sur la goutte de votre échantillon. Laissez en contact pendant environ 1 minute.
  3. Égouttez la grille à l’aide de papier filtre.
  4. Contrastez la grille en la plaçant en contact avec la goutte de UranyLess pendant 1 minute.
  5. Égouttez, laissez sécher pendant 5 minutes, puis observez sous le microscope.

Ajustement de la Technique :

  • Il peut arriver que vous ayez très peu d’échantillon sur votre grille ; dans ce cas, ionisez votre grille.
  • Si vous avez trop d’échantillon, rincez la grille sur une goutte d’eau avant de procéder au contraste.
  • Si la coloration est trop intense, rincez la grille pendant 1 minute dans l’eau après le contraste avec UranyLess.

Uranyless Cryo

Uranyless anhydre en acétone est principalement utilisé pour les méthodes cryogéniques, telles que la cryosubstitution AFS. Cette solution est idéale pour les applications nécessitant un mélange avec des solutions fixatives telles que le PFA, le glutaraldéhyde ou l’OsO₄, et elle est particulièrement adaptée à l’inclusion cryogénique en résine.

Protocol:

  1. Préparation : Mélangez Uranyless anhydre avec de l’acétone à 100 %.
  2. Lavage : Effectuez un lavage à l’acétone à 100 % deux fois pendant 30 minutes chacune.
  3. Application du contraste : Utilisez Uranyless anhydre pour cryo dans de l’acétone.

Notes supplémentaires :
Uranyless en acétone est une solution à base de lanthanides, spécialement formulée pour les applications de cryofixation AFS. Lorsqu’il est utilisé en combinaison avec OsO₄, il est recommandé de suivre un protocole spécifique afin d’éviter les interactions indésirables qui pourraient réduire l’efficacité de Uranyless.

Uranyless Alcool

Uranyless en éthanol est utilisé pour le contraste des tissus très denses et riches en lipides, qui sont souvent difficiles à colorer avec d’autres agents. La solution à 30 % d’éthanol permet au contraste de pénétrer efficacement, en particulier dans les tissus riches en collagène dense, comme la cornée. Cette concentration représente un compromis idéal, assurant une pénétration en profondeur sans dissoudre les structures lipidiques.

Protocol:

  1. Contraste : Appliquez Uranyless/éthanol pendant 2 à 3 minutes.
  2. Lavage : Rincez avec de l’alcool à 30 % pendant 1 minute, puis tamponnez.
  3. Contraste supplémentaire : Appliquez du citrate de plomb #11 300 (Reynolds) pendant 1 à 2 minutes.

Notes supplémentaires :
Uranyless est préparé dans une solution de 30 % d’éthanol avec de l’eau, ce qui facilite la pénétration du contraste, en particulier dans les tissus riches en collagène dense.

EM Stain Uranyless alcohol protocol

FAQ

UranyLess aqueux est une solution prête à l’emploi, composée d’un mélange de lanthanides (terres rares).

Actuellement, UranyLess est uniquement commercialisé sous forme aqueuse (à base d’eau).

Sa durée de conservation est illimitée. Avec un flacon de 30 ml, vous aurez environ un an d’utilisation.

Il est conseillé de ne pas réfrigérer ce produit, mais de le conserver à température ambiante. Il n’est pas sensible à l’air ni à la lumière.

Si vos tissus riches en lipides (comme les tissus nerveux, adipeux ou certains tissus végétaux) présentent un contraste faible, réduisez les lavages à l’eau.
Contrairement à l’acétate d’uranyle, qui agit à la fois comme agent de contraste et fixateur (ce qui le rend toxique en plus d’être radioactif), UranyLess n’est pas un fixateur, ne se lie pas de manière permanente et est plus facilement éliminé lors des lavages à l’eau. Réduisez donc le temps de lavage après le contraste avec UranyLess pour éviter une perte excessive du contraste.

Oui, il est compatible avec toutes les résines (Epon, Araldite, Spurr…).

Oui, nous avons maintenant testé le nouveau UranyLess dissous dans de l’acétone anhydre à 100 % (distillée au verre), spécialement adapté pour la cryopréservation, utilisé pour le colorant bloc entier lors de l’utilisation de AFS (voir protocole).

Nous commercialisons UranyLess en flacon de 30 ml dans un flacon Airless, ainsi qu’en flacon de 200 ml dans un flacon brun.

Son utilisation est très simple : il suffit d’appuyer sur le capuchon pour libérer une goutte. Lorsque vous relâchez, la pompe à piston située au fond du flacon se remonte, ce qui empêche l’air d’entrer dans le flacon.

UranyLess est vendu prêt à l’emploi. Il n’est pas nécessaire de le diluer.

Le pH d’UranyLess est de 6,8, contrairement à celui de l’acétate d’uranyle, qui est de 4.

Placez simplement votre grille sur une goutte de UranyLess et attendez 1 minute. Laissez sécher, puis contrastez avec du citrate de plomb selon la méthode de Reynolds. Vous pouvez accéder au protocole dans la section Documents Techniques ou en cliquant sur le lien suivant : Le contraste classique.

Oui, le double contraste UranyLess – Citrate de plomb est utilisé.

Oui. Le protocole peut être consulté sur la page Coloration Négative.

Oui, UranyLess offre de bons contrastes sur les matériaux marins.

Les déchets UranyLess doivent être éliminés dans des conteneurs pour métaux lourds (terres rares). Veuillez consulter la Fiche de Données de Sécurité (FDS) pour obtenir plus d’informations.

Tout d’abord, il s’agit d’un flacon dans lequel l’air n’entre jamais. Certains produits, comme le citrate de plomb, sont sensibles au CO₂ atmosphérique. Grâce à ce système, ces produits bénéficient d’une durée de conservation plus longue. De plus, il permet de doser le produit goutte à goutte, rapidement, proprement, et dans toute position. Pour plus d’informations, veuillez consulter notre offre commerciale.

À l’origine, notre UranyLess classique, qui est le plus utilisé, est basé sur de l’eau distillée. À la demande de plusieurs utilisateurs, nous avons développé un UranyLess pour cryo AFS (coloration en bloc) à base d’acétone anhydre, ainsi qu’un UranyLess à base d’éthanol/eau à 30% pour colorer des tissus fibres très denses. Avec cet UranyLess alcool, l’agent de contraste pénètre en profondeur et permet d’obtenir un meilleur résultat.

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