Protocole d'utilisation
Protocole classique : Protocole pour l’utilisation du double contraste sur des coupes ultrafines avec UranyLess / Citrate de plomb Ce protocole est adapté aux échantillons biologiques préalablement fixés par des méthodes conventionnelles telles que le glutaraldéhyde, l’osmium, le ruthénium, et inclus dans des résines époxy (Epon, Araldite, Spurr) ou acryliques (LRWhite, HM20, etc.).
Protocole de contraste :
- Déposez une goutte d’Urany-Less sur du parafilm ou toute autre surface hydrophobe.
- Placez la grille sur la goutte d’Urany-Less (1 à 2 minutes).
- Épongez la grille sur du papier filtre avant de la rincer soigneusement à l’eau distillée.
- Laissez sécher.
- Après séchage, renforcer le contraste avec du citrate de plomb selon Reynolds (1963) :
- Placer la grille sur la goutte de citrate de plomb selon la méthode de Reynolds dans une atmosphère saturée en sodium (1 minute).
- Épongez la grille sur du papier filtre avant de la rincer soigneusement à l’eau distillée.
- Laissez sécher.
Avertissements :
- UranyLess n’est sensible ni à l’air ni à la lumière, contrairement à l’acétate d’uranium.
- Après le bain de citrate de plomb, rincez dans de l’eau distillée fraîchement préparée, car l’eau absorbe le CO2 atmosphérique. Vous pouvez également laver avec de l’eau contenant 0,01 N NaOH.
- Ne vous lavez jamais dans de l’eau contenant de l’hydroxyde de sodium lors du premier contraste avec UranyLess.
- Si un précipité est présent dans la solution, veillez à la centrifuger ou à la filtrer avant de l’utiliser.
- Laissez la solution Urany-Less revenir à la température ambiante pendant quelques minutes si elle a été conservée au réfrigérateur, afin de garantir un temps de coloration constant.
- Ne conservez pas le citrate de plomb dans un environnement froid, car il absorbe le CO2 et devient gazeux.
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