Le Contraste classique - Uranyless

…… autre video protocole

Protocole classique :

Protocole d’utilisation du double contraste sur coupes ultrafines UranyLess / citrate de plomb

Ce protocole est adapté à des échantillons biologiques préalablement fixés classiquement comme : glutaraldéhyde, osmium, ruthénium… inclus dans une résine type époxy (Epon, Araldite, Spurr) ou acrylique (LRWhite, HM20, …).

Protocole de contraste :

1- Déposer une goutte d’Urany-Less sur du parafilm ou tout autre support hydrophobe.

2- Déposer la grille sur la goutte d’Urany-Less (1 à 2 min)

3- Egoutter la grille sur papier filtre avant de laver soigneusement à l’eau distillée.

4- Laisser sécher.

colo classique

Après séchage procéder au renforcement du contraste au citrate de plomb selon Reynolds (1963)

5- Déposer la grille sur la goutte de citrate de plomb selon la méthode de Reynolds en atmosphère saturée en soude (1 min)

6- Egoutter la grille sur papier filtre avant de laver soigneusement à l’eau distillée.

7- Laisser sécher.

Avertissements :

– L’UranyLess n’est pas sensible ni à l’air ni à la lumière contrairement à l’Acétate d’Uranyle.

– Après le bain de citrate de plomb, rincer dans une eau distillée fraîchement préparée car l’eau est une véritable éponge du CO2
atmosphérique. Ou bien laver avec de l’eau contenant 0,01 N de NaOH.

Attention ne jamais laver dans de l’eau contenant de la soude au premier contraste à l’uranyLess.
-Si présence d’un précipité dans la solution, prenez soin de bien centrifuger ou filtrer avant son utilisation.
-Laisser la solution d’Urany-Less revenir à température ambiante quelques minutes si celle-ci est conservée au réfrigérateur, afin de garantir la reproductibilité des temps de coloration.
-Ne pas conserver le citrate de plomb au frais sinon il se charge en CO2 et devient gazeux.

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